polyplus-transfection FectoPRO說明書
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| 試劑 | FectoPRO ® |
|---|---|
| 分子交付 | 脫氧核糖核酸 |
| 應用 | 生物生產 |
| 細胞類型 | 懸浮液 CHO、HEK-293 和衍生物 |
| 轉染次數(shù) | 1 mL FectoPRO ®足以將 800 mL 的細胞培養(yǎng)物轉染超過 1 L |
| 貯存 | 5°C ± 3°C，如果儲存得當，自生產之日起可穩(wěn)定 3 年 |
| 提供 | FectoPRO ®助推器 |
使用瞬時轉染和基因表達實現(xiàn)蛋白質產量。
FectoPRO轉染試劑專為使用低 DNA 量（< 1 µg/ml 細胞培養(yǎng)物）在各種無血清培養(yǎng)基中的懸浮 CHO 和 HEK-293 細胞中增強瞬時基因表達 (TGE)而設計。
FectoPRO® 介導的轉染過程可以輕松地從幾毫升細胞培養(yǎng)物擴展到幾升細胞培養(yǎng)物，確保強大的可重復蛋白質生產。更高的生產力和低 DNA 量要求使 FectoPRO® 成為生物生產過程的經(jīng)濟高效的解決方案。
| 參考編號 | 產品 | 轉染試劑 | 表達助推器 | 表達培養(yǎng)基 |
|---|---|---|---|---|
| 116-001 | FectoPRO® 試劑 | 1 毫升 | 1 毫升 | —— |
| 116-010 | FectoPRO® 試劑 | 10 毫升 | 10 毫升 | —— |
| 116-100 | FectoPRO® 試劑 | 100 毫升 | 100 毫升 | —— |
| 716-06L | FectoCHO® CD 培養(yǎng)基 | —— | —— | 6 x 1 升 |
| 716-01LKIT | FectoCHO® 表達系統(tǒng) | 1 毫升 | 1 毫升 | 1升 |
FectoPRO ®在無血清培養(yǎng)基中懸浮生長的 CHO 和 HEK-293 細胞中實現(xiàn)了驚人的高蛋白質和抗體產量（圖 1）。
圖 1. FectoPRO ®在懸浮 CHO 細胞中產生驚人的抗體產量。將細胞以 1 x 10 6細胞/ml接種到30 ml FreeStyle™ CHO 表達培養(yǎng)基中，并按照各自推薦的方案用 FectoPRO ® (0.8 µg DNA/ml) 或 FreeStyle™ MAX 試劑 (1.25 µg DNA/ml)轉染試劑。使用蛋白 G 生物傳感器（fortéBIO ®octet RED96 系統(tǒng)）在轉染后 1 至 6 天測定重組小鼠 IgG 的產量。FreeStyle™ 是 Life Technologies™ Corporation 的商標。數(shù)據(jù)由 ProteoGenix SAS（法國）友情提供。
探索我們專用于 cho 細胞的試劑盒：FectoCHO ®表達系統(tǒng)
在轉染效率方面，FectoPRO ®在很大程度上優(yōu)于其他轉染試劑，例如生物生產過程中常用的線性 PEI（圖 2），從而導致更高的蛋白質產量（圖 3）。
圖 2. FectoPRO ®在懸浮 CHO 細胞中提供高轉染效率。將 FreeStyle™ CHO-S 細胞以 1 x 10 6 個細胞/ml接種到30 ml FreeStyle™ CHO 表達培養(yǎng)基中，并使用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster 或 FreeStyle™ MAX Reagent 使用 0.4 µg/ml 和 1.25 µg/ml分別是 GFP 表達質粒。使用熒光顯微鏡在轉染后 24 小時測定 GFP 表達。
圖 3. FectoPRO ®在懸浮 CHO 和 HEK-293 細胞中提供了蛋白質產量。FreeStyle™ CHO-S 和 HEK-293F 細胞以 1 x 10 6細胞/ml接種在 30 ml FreeStyle™ CHO 或 293 表達培養(yǎng)基中，并用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.4 µg DNA/ml)、FreeStyle™轉染MAX Reagent (1.25 µg DNA/ml) 或 PEIpro ® (1 µg DNA/ml) 遵循各自試劑的推薦方案。在轉染后 72 小時（CHO 細胞）和 120 小時（HEK-293 細胞），通過蛋白 G 親和定量 (HPLC) 和蛋白質印跡分析 IgG3-Fc (34 kDa) 的產生。標準品對應于純化的 IgG3-Fc (34 kDa)。
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高質量的質粒 DNA 制備可能非常昂貴，尤其是當大規(guī)模蛋白質生產需要大量 DNA 和許多質粒時。FectoPRO ®使用 0.4 至 0.6 µg DNA / 10 6細胞 / ml 細胞培養(yǎng)物可節(jié)省 40 至 60% 的 DNA 成本；因此使該套件成為生物生產過程的經(jīng)濟實惠的解決方案。
表 1.根據(jù)制造商的建議，用于轉染的 DNA 量和試劑量（FectoPRO ®和競爭對手）。
蛋白質生產過程的持續(xù)時間在過去幾年有所增加，現(xiàn)在大多數(shù)蛋白質生產過程持續(xù) 1-2 周以獲得最佳蛋白質生產量。FectoPRO ® 的開發(fā)旨在確保持續(xù)數(shù)天的蛋白質生產，同時保持高細胞活力以實現(xiàn)更持久的蛋白質生產（圖 4）。
圖 4. FectoPRO ®在懸浮細胞中提供持續(xù)的蛋白質生產。FreeStyle™ HEK-293F 細胞以 1 x 10 6細胞/ml接種在 30 ml FreeStyle™ 293 表達培養(yǎng)基中，并按照標準方案用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.5 µg DNA/ml)轉染。在不同時間點后通過蛋白 G 親和力定量 (HPLC) 測定 IgG3-Fc 的產生。使用 FreeStyle™ CHO-S 獲得了類似的結果（數(shù)據(jù)未顯示）。
使用可輕松適應各種培養(yǎng)容器的強大方案簡化您的生物生產過程。FectoPRO ®介導的轉染可以從 30 毫升線性擴展到升細胞培養(yǎng)物，無需修改方案（圖 5）。
圖 5. FectoPRO ®在 CHO 細胞中易于擴展和重現(xiàn)。FreeStyle™ CHO-S 細胞以 1 x 10 6 個細胞/ml接種在 30 ml、100 ml、300 ml 或 1 L FreeStyle™ CHO 表達培養(yǎng)基中，并用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.5 µg DNA/ml)轉染. 在第 1 天至第 6 天，使用臺盼藍排除測定法測定細胞活力，并通過蛋白 G 親和力定量 (HPLC) 和蛋白質印跡法測定 IgG3-Fc 的產生。標準品對應于純化的 IgG3-Fc (34 kDa)。
FectoPRO ®是使用高度受控的生產過程制造和配制的。這確保了從實驗到實驗的高度可重復的結果。此外，為了滿足當前的監(jiān)管指南，F(xiàn)ectoPRO ®發(fā)布時采用了先進的質量控制，包括蛋白質生產力規(guī)范，以保證批次間的出色一致性（圖 6）。
圖 6. FectoPRO ®具有出色的批次間重現(xiàn)性。懸浮CHO細胞以1 x 10 6細胞/ml接種在30ml CHO培養(yǎng)基中，并按照標準方案使用3個不同批次的FectoPRO ® (CCIII 078、CCIII 104或CCIII 106)進行轉染。轉染后 72 小時，通過蛋白 G 親和力定量分析 IgG3-Fc 的產生。在懸浮的 HEK-293 細胞上獲得了類似的結果（數(shù)據(jù)未顯示）。
與其他市售試劑不同，F(xiàn)ectoPRO ®轉染試劑盒適用于 CHO 和 HEK-293 細胞（圖 2 和 3）。該試劑兼容多種培養(yǎng)基配方；因此，實驗室實施簡單明了（圖 7，表 2）。
圖 7. FectoPRO ®在不同培養(yǎng)基中生長的懸浮 CHO 細胞中提供了蛋白質產量。將 CHO 細胞以 1 x 10 6細胞/ml接種到30 ml FreeStyle™ CHO 表達培養(yǎng)基、CD CHO 培養(yǎng)基或 Pro-CHO™ 4 培養(yǎng)基中，并按照推薦的方案用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster 或 FreeStyle™ MAX 試劑轉染各自的試劑。在轉染后 72 小時通過蛋白 G 親和定量 (HPLC) 測定 IgG3-Fc 的產生。
表 2.在不同培養(yǎng)基中使用 FectoPRO ®培養(yǎng) CHO 細胞的蛋白質產量。
表 3. HEK-293 細胞在不同培養(yǎng)基中使用 FectoPRO ® 的蛋白質產量。
探索我們專用于 CHO 細胞的試劑盒：FectoCHO ®表達系統(tǒng)
FreeStyle TM、CD FortiCHO TM、CD OptiCHO TM、Expi293 TM、ExpiCHO TM和CD293 是Gibco ® 的商標。
Pro-CHO TM、PowerCHO TM和 Pro293 TM是 Lonza TM Group 的商標。
HyClone TM、HyCell TM和TransFx TM是GE Healthcare TM 的商標。
BalanCD ®和Transfectory TM是Irvine Scientific公司的商標TM。
蛋白質生產包括在細胞系中以小/中到大規(guī)模過表達重組蛋白質或肽。產生的生物分子可用于研究目的，如結構表征，一直到治療或醫(yī)學應用。
FectoPRO ®符合生物制造指南。事實上，F(xiàn)ectoPRO ®保證不含動物源成分，并且是化學成分確定的。對生產的每個批次進行系統(tǒng)的批次管理和放行測試。此外，F(xiàn)ectoPRO ®轉染試劑盒經(jīng)過先進的質量控制：蛋白質生產力、細胞活力和*無菌。
此外，Polyplus-transfection ®自 2002 年起獲得 ISO 9001 質量管理體系認證；這一級別的認證向全球客戶保證，供應商已為產品開發(fā)、制造、銷售和客戶支持建立了可靠且有效的流程。
